細(xì)胞培養(yǎng)玄學(xué)-MRC-5細(xì)胞

MRC-5細(xì)胞，還有那些兄弟姐妹WI-38啥的，非常有用，廣泛應(yīng)用在病毒學(xué)實驗上，但是超級難養(yǎng)，非常讓人困擾。

zui近有人問起了MRC-5細(xì)胞，說實在這東西培養(yǎng)挺難的，而且充滿玄學(xué)成分?？鋸埖恼f10個實驗室有9個實驗室養(yǎng)不好。隔壁土豪研究所每次要用就買一批，傳代3次做完實驗就扔了，因為越傳越差沒必要留，也留不住。我們實驗室的方法是另一個實驗室教的，他們畢業(yè)前來了新的研究生，天天跟著養(yǎng)細(xì)胞，養(yǎng)了2個月沒養(yǎng)好，操作看起來啥都沒問題，都快哭了。我跟著學(xué)了一次，很幸運學(xué)會了，回來傳給手下，看起來也沒問題。可是zui近連續(xù)復(fù)蘇3次，都是傳2代就不行了，半個月也長不滿。我zui近親自復(fù)蘇了一批，還拍了照片，給大家看看吧。我們是1個T75凍存3支，所以復(fù)蘇也是直接復(fù)蘇在T75里的，復(fù)蘇三天長滿，1:3傳代3天長滿。其他人沒傳好的那些，復(fù)蘇3天長滿，傳代后5天只能長到9成，不肯再長了，再傳代現(xiàn)在10天過去了，勉強長到6成。

培養(yǎng)基其實沒啥區(qū)別，DMEM、1640、MEM我都用過，都能養(yǎng)，我現(xiàn)在用DMEM養(yǎng)，上一代沒看清楚用的1640，一樣3天長滿沒任何問題。血清用國產(chǎn)的850塊500mL一瓶的，也沒問題，不過是別人篩過的批號，他們說這個批號好，我們跟風(fēng)買了幾十瓶。

關(guān)鍵在于胰酶，胰酶要很弱雞的那種（自己用粉末配的都很弱雞），不含EDTA，必須含葡萄糖。一個T75放8mL泡個3min就差不多了，吸掉6.5mL，用手拍一下T75兩邊，震一下就全掉下來了。至于養(yǎng)不養(yǎng)的好，剩下的就靠個人悟性了。

好的MRC-5，一定要長到這么滿才傳，這細(xì)胞有密度依賴性，太稀傳代就嗝屁了。

傳代后第貳天貼壁，長這樣的，3天長滿

如果傳不好第貳天貼壁后就很瘦弱，長得很慢，像這樣。長成這樣后，無論你再怎么努力，換再好的培養(yǎng)基、血清也沒救啦，也就勉強用用